1900年metalnikov发现,精子具有诱发特异性自身免疫和同种免疫的能力。为了研究不育问题,科学家们经过大量实验室和临床证明,虽然引起自身抗体和同种抗体的病因学尚不清楚,但他们是与不育不孕有关的。据文献报道,育龄期夫妇中不孕者约占10%,其中约有30%是由免疫性因素造成的[1],而男性不育患者血清和精液中抗精抗体的阳性率约为3.5%,女性不孕患者血清和宫颈粘液中抗精抗体阳性率比男性高一倍以上[2]。本文应用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测如下四种可导致不育,不孕的抗体:抗精抗体(AsAb)、抗子宫内膜抗体(AEMAb)、抗卵巢抗体(AovAb)、抗人绒毛膜促性腺激素抗体(AhcGAb)。从而为免疫性不育、不孕的诊断和治疗提供可靠的依据。
1 材料和方法
随机选择正常生育男性自愿者20人,正常生育女性自愿者20人为对照组。不育男性30人,不孕女性30人为实验组。分别采集精液、宫颈粘液和血液样品待测。(ELISA)药盒由北京医科大学生殖医学研究中心提供。
2 样品检测
①按药盒说明书要求将洗液、二抗、底物A、底物B、底物C配制好。②将待测血清10ul+90ul洗液,精浆、宫颈粘液用原液每孔加100ul;阳性对照血清10ul+90ul洗液;空白孔加洗液100ul;置室温2h。③洗涤6次,甩干,每孔加二抗100ul,置室温2h。④洗涤6次,甩干。每孔分别加底物液100ul(底物液的配制:将底物A 0.5ml、底物B 4.5ml、底物C 4ul混合后即刻使用),避光置室温10~20min,当阳性对照孔出现天蓝色后,即可加终止液每孔30ul,判定结果以酶标仪OD450定量。
3 结果与讨论
正常生育男、女对照组四种抗体检测的结果均为阴性。而实验组30名男性中,有3人精液的抗精抗体为阳性,有2人血清的抗精抗体为阳性。实验组的30名女性中,宫颈粘液抗精抗体为阳性的1人,血清抗精抗体为阳性的1人、抗子宫内膜抗体为阳性的5人、抗卵巢抗体为阳性的1人、抗人绒毛膜促性腺激素抗体为阳性的3人。本文采用酶联免疫吸附法检测了可能导致不孕的四种抗体,其检测的临床意义如下。①抗精抗体(AsAb),男女体内都可能存在抗精抗体,精液内存在多种抗原,这些抗原在女性生殖道中,可经宫颈上皮吸附后产生免疫反应。在女方血液和生殖道局部产生抗精子抗体,这种抗体可影响精子的运行,导致不孕。正常情况下,男性体内不会产生自身的抗精抗体,但当男性输精管发生炎症和某些病变时,精液就可能渗漏到外围组织中去,从而产生自身的抗精抗体,导致不育[2,3]。②抗子宫内膜抗体(AEMAb),当女性子宫内膜有炎症时,可能转化成抗原或半抗原,刺激机体自身产生相应的抗体。此外,人工流产刮宫时,胚囊也可能作为抗原刺激机体产生抗体。便会导致不孕、停孕或流产。不少女性因在初次妊娠时作了人工流产,而继发不孕,这种继发不孕患者多数是因体内产生抗子宫内膜抗体所致不孕。③抗人绒毛膜促性腺激素抗体(AhcGAb),人绒毛膜促性腺激素(hcG)是维持早期妊娠的主要激素。但是有自然流产史的女性,在流产过程中,绒毛膜组织中的hcG可能作为抗原刺激母体产生抗体,曾接受过hcG注射以治疗功能性子宫出血或促进排卵的妇女中,其体内的抗hcG抗体也有可能为阳性,此类患者可在临床表现为不孕或习惯性流产[1,4]。④抗卵巢抗体(AovAb),在六、七十年代,已发现卵巢存在特殊抗原。近年来报道抗卵巢自身免疫可影响卵巢的发育和正常功能,从而导致卵巢衰竭和卵泡成熟前闭锁而导致不孕。